Gemeinsam haben wir eine neue kinaseunabhängige Funktion von EGFR / EGFRvIII entdeckt, die zu einer Resistenz gegen Tumormedikamente führt. Die meisten Antikrebsmittel induzieren eher eine intrinsische Mitochondrien-vermittelte Apoptose als eine extrinsische Todesrezeptor-vermittelte Apoptose [19; 20]. Die anti-apoptotischen Mitglieder der Bcl-2-Proteinfamilie, einschließlich Bcl-2, Bcl-xL und Mcl-1, sind Hüter der mitochondrialen Integrität [19; 21; 22].
Obwohl eine direkte regulatorische Rolle von EGFR / EGFRvIII bei der Apoptose nicht berichtet wurde, wurde kürzlich gezeigt, dass ErbB4, ein Mitglied der EGFR-Familie puma damen schuhe von Rezeptortyrosinkinasen, mit dem anti-apoptotischen Bcl-2-Protein interagiert, um die Apoptose zu fördern [ 25]. Die therapeutische Aktivierung des apoptotischen Weges hat sich als attraktive Behandlungsstrategie für eine Reihe von Krebsarten herausgestellt, darunter GBM puma sneaker [26; 27]. Bei GBMs wurde bisher jedoch keine systemische Analyse des Expressionsprofils der proapoptotischen Mitglieder der Bcl-2-Proteinfamilie berichtet, und die Beziehung zwischen diesen proapoptotischen Proteinen und EGFR / EGFRvIII bleibt bei GBMs unklar.
Diese Ergebnisse liefern zusammen mit zusätzlichen Daten aus funktionellen Studien Hinweise auf eine neuartige inverse funktionelle Verbindung zwischen dem EGFR / EGFRvIII-Signal und dem proapoptotischen Signalweg. Dies kann ein Mechanismus sein, der die EGFR-assoziierte puma cali Arzneimittelresistenz bei GBM und möglicherweise auch bei anderen erklärt Krebstypen, die auch EGFR und PUMA coexprimieren. Alle Chemikalien wurden von Sigma (St. Louis, MO) gekauft, sofern nicht anders angegeben. Polyklonaler Kaninchen-Anti-EGFR-Antikörper, der beim Western Blot verwendet wurde, wurde von Santa Cruz Biotech gekauft.
Der polyklonale Kaninchen-Cox-IV-Antikörper stammte von Abcam (Cambridge, MA), während der polyklonale Kaninchen-PUMA-, Bad-, Bim-, Bmf-, Bok-, pEGFR- (Y1068), Bcl-2-, Bcl-xL- und Mcl-1-Antikörper von Cell Signaling ( Danvers, MA). Alle Transfektionen wurden unter Verwendung von Lipofectamin LTX (Invitrogen, Carlsbad, CA) und FuGENE HD (Roche) durchgeführt. Alle siRNAs wurden von Upstate / Dharmacon (Lafayette, CO) gekauft und die puma schuhe damen Sequenzen sind 5'-CGGACGACCUCAACGCACA-3 '(humane PUMA-siRNA) und 5'-UGGUUUACAUGUCGACUAA-3' (Kontroll-siRNA). Der Bcl-2 / Bcl-xL-Inhibitor 2-Methoxyantimycin A3 (2-MA A3) wurde von BIOMOL (Plymouth Meeting, PA) gekauft.
Nach Gegenfärbung mit Mayer-Hämatoxylin (Sigma) wurden die Seiten montiert. Die Bewertung wurde von einem Pathologen durchgeführt. Histologische Scores (H-Scores) wurden sowohl aus% Positivität (A%, A = 1-100) als auch Intensität (B = 0-3) unter Verwendung der Gleichung H Score = A × B gemäß einem gut etablierten IHC berechnet Bewertungssystem [30]. Dies wurde mittels mitochondrialer Fraktionierung unter Verwendung eines Assay-Kits von Pierce (Rockford, IL) gemäß den Anweisungen des
Herstellers durchgeführt, um mitochondriale und nicht mitochondriale Fraktionen zu erhalten.